p27蛋白在乳腺癌中的表达与预后的关系
作者：曹红亮 张广德 夏文华 肖继平 陈爱军
单位：曹红亮(湖北医科大学附属第二医院肿瘤科，湖北武汉430071)；张广德(湖北医科大学附属第二医院肿瘤科，湖北武汉430071)；夏文华(湖北医科大学附属第二医院肿瘤科，湖北武汉430071)；肖继平(湖北医科大学附属第二医院肿瘤科，湖北武汉430071)；陈爱军(湖北医科大学附属第二医院肿瘤科，湖北武汉430071)
关键词：p27；乳腺癌；免疫组织化学；预后
摘 要
摘 要：目的：p27基因是一种肿瘤抑制基因。它在人类一些恶性肿瘤的表达水平与预后呈正相关。本研究探讨其在乳腺癌中的表达水平与预后的关系。方法：用免疫组化检测p27蛋白在66例乳腺癌中的表达水平，然后用χ2检验其与临床病理学特征的关系，Logrank检验p27的表达与生存时间的关系，Cox回归模型作单因素和多因素预后分析。结果：p27在乳腺癌中的高表达率为53.03%(35/66)；低表达率为46.97%(31/66)。p27低表达与乳腺癌分期晚，易发生淋巴结转移、局部复发和远处转移显著相关，Logrank检验发现p27蛋白的表达与乳腺癌患者的生存期呈正相关，Cox模型则显示p27是乳腺癌的一个独立的预后标志物。结论：p27低表达与乳腺癌分期晚，易发生淋巴结转移、局部复发、远处转移、以及预后差、生存期短显著相关，p27高表达则相反。我们认为p27蛋白是乳腺癌的一个独立的预后标志物。
, 百拇医药
分类号：R737.9 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(2000)03-0239-03
The relationship between p27 expression in
breast cancer and the prognosis
CAO Hong-liang ZHANG Guang-de XIA Wen-hua et al.
(Department of Oncology,The Second Affiliated Hospital of Hubei Medical University,Hubei Wuhan 430071,P.R. China)
Abstract：Objective： The relationship between the expression of p27 tumor suppressor gene and prognosis of breast cancer was studied.Method： The expression of p27 in 66 breast cancer specimens was detected by immunohistochemical method. The relationship between p27 expression and clinicopathological characteristics or survival time was analyzed by χ2 test or log rank test, respectively, while univariate and multivariate prognostic analyses were performed by using Cox's regression model. Results： The high p27 expressive rate in breast cancer was 53.03% (35/66),while low expressive rate was 46.97% (31/66). Low p27 expression in breast cancer was significantly associated with late TNM stage, high incidence of lymph node metastasis,local recurrence and distant metastasis.Log rank test showed that the p27 expression was positively correlated with survival time and Cox's regression indicated that p27 was an independent prognostic marker of breast cancer. Conclusion： Low p27 expression in breast cancer was significantly associated with late TNM stage,high incidence of lymph node metastasis, local recurrence， distant metastasis， poor prognosis and, short survival time. p27 is an independent and valid prognostic marker of breast cancer.
, http://www.100md.com
Key words：p27;Breast cancer;Immunohistochemistry;Prognosis▲
p27是由Poly等[1]在1994年用TGF-β和细胞接触抑制导致的静止细胞MV1Lu抽提物中发现的一分子量为27KD的热稳定蛋白。人p27基因定位于12P13，它的表达产物P27蛋白能通过抑制细胞周期素依赖性的蛋白激酶而抑制细胞周期，从而阻止肿瘤的形成。国外学者发现p27蛋白在非小细胞肺癌、T1a,b期乳腺癌、结肠癌、巴雷特食道癌和前列腺癌中[2～6]的表达水平与淋巴结转移可能性大，预后差显著相关。我们用免疫组化对66例乳腺癌的p27蛋白的表达水平进行了检测并分析了其与临床病理学特征和预后的关系。
1 材料与方法
1.1 材料
, http://www.100md.com 取自我院肿瘤科1987～1994年收治的经病理证实的且有随访和预后资料的原发性乳腺癌66例，患者年龄19～74岁，平均49岁，随访48～120个月(中位期82个月)，全组病例均行乳腺癌根治术或改良根治术，术后18例辅以化疗，11例辅以放疗，17例辅以放化疗，20例未行辅助治疗。
1.2 试剂与方法
p27鼠抗人单克隆抗体、SP二抗试剂盒和DAB显色试剂盒均购自福建迈新公司，一抗工作浓度1∶50。免疫组化实验步骤按说明书进行，抗原修复采用高压修复。PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判断
由两位免疫组化室的病理医师在不知道任何临床和病理资料的情况下对免疫组化染色进行评估，p27在乳腺癌中的表达主要位于胞浆，胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，每个视野阳性细胞数<50%为低表达，≥50%为高表达[5]，每张切片至少观察5个视野。
, 百拇医药
1.4 统计学分析
用SPSS7.0统计软件进行统计分析，计数资料用卡方检验，生存曲线比较用Logrank检验，单因素和多因素预后分析采用Cox回归模型。
2 结果
2.1 p27在乳腺癌中的表达与临床病理学特征的关系
p27在乳腺癌中的表达主要位于胞浆(图1,2)，只有少数胞核着色。p27高表达率为53.03%(35/66)，p27低表达率为46.97%。p27低表达与乳腺癌分期晚，易发生淋巴结转移、局部复发、远处转移显著相关，p27高表达则相反。p27表达与年龄、月经状况、肿瘤大小无明显相关性，(表1)。
表1 p27的表达与乳腺癌临床病理学特征的关系
临床病理学特征
, 百拇医药
n
p27的表达情况
χ2
P值
低表达
高表达
年龄(岁)
<50
44
22
22
0.64
>0.25
, http://www.100md.com
≥50
22
9
13
月经状况
绝经前
49
24
25
0.31
>0.5
绝经后
17
, 百拇医药 7
10
肿瘤大小(cm)
<2.0
8
3
5
2.18
>0.25
2～5
37
15
22
>5.0
, 百拇医药
21
13
8
淋巴结状况
+
41
25
16
8.5
<0.005
-
25
6
19
, 百拇医药
分期
Ⅰ、Ⅱ
30
9
21
6.36
<0.025
ⅢⅣ
36
22
14
ER
+
45
, 百拇医药
17
28
4.8
<0.05
-
21
14
7
局部复发
无
42
12
30
15.70
, 百拇医药
<0.005
有
24
19
5
远处转移
无
54
19
35
-
<0.001
有
12
, 百拇医药
12
0
图1 乳腺浸润性导管癌,细胞浆p27高表达,SP×400
图2 乳腺髓样癌,细胞浆p27低表达,SP×400
2.2 p27的表达与乳腺癌患者生存期的关系
p27高表达组35例，术后行化疗者8例，行放疗者6例，放疗化疗都采用者9例，未行辅助治疗者12例；p27低表达组31例，术后行化疗者10例，行放疗者5例，放疗化疗都采用者8例，未行辅助治疗者8例，两组之间的治疗方式无差异(χ2=0.600,P>0.75)
, http://www.100md.com
在全部患者中p27高表达组与低表达组的生存曲线如图3所示，表明p27的表达与乳腺癌患者的预后呈正相关，p27高表达生存期明显高于p27低表达。在淋巴结阳性和阴性患者中，p27高表达的生存期也都明显长于p27低表达者。
图3 全部病人p27表达与生存期的关系
Cox单因素、多因素分析结果发现p27是乳腺癌的一个独立的预后标志物(表2、表3)。
表2 66例乳腺癌单因素Cox模型分析结果
因素
参数
, http://www.100md.com
风险比
标准误
χ2
P值
肿瘤大小
1.0096
2.744
0.4746
4.5211
0.0335
淋巴结状况
1.3372
3.809
, http://www.100md.com
0.4586
8.504
0.0035
分期
0.8471
2.333
0.2854
8.8121
0.003
ER
-0.4638
0.629
0.4273
, 百拇医药
1.1783
0.2777
p27
-2.7989
0.061
0.7440
14.1526
0.0002
表3 66例乳腺癌多因素Cox模型分析结果
因素
参数
风险比
, 百拇医药
标准误
χ2
P值
淋巴结状况
1.6450
5.181
0.5378
9.3555
0.0022
p27
-2.9674
0.051
0.7673
, 百拇医药
14.9578
0.0001
3 讨论
近些年来，在细胞生物学和分子生物学方面的进展虽然大大地加深了对肿瘤发生、发展的认识，但其具体的机制尚未完全阐明，目前恶性肿瘤的治疗一般仍以手术为主，化疗、放疗为辅。何种病人术后需要行辅助治疗临床上主要还是根据淋巴结有无转移、TNM分期、病理类型。然而有的患者淋巴结无转移、TNM分期较早，但是治疗后生存期仍很短，这与肿瘤的生物学特性有关，为了判断肿瘤的生物学特性，国内外学者目前都在致力于研究能够预测恶性肿瘤病人预后的生物学指标，目的是更合理的应用综合治疗方法，以提高患者的生存期。
p27就是国外学者研究得较多的一种预后因子。Puay等[3]发现p27在T1a,b期乳腺癌中的低表达与淋巴结转移可能性大、生存期短、预后差显著相关，p27高表达则相反，而其他的生物学指标(p53、ER、PR、MVD、ki-67/MIB-1cdc25B、C-erB2)与T1a,b期乳腺癌的预后没有显著相关性。其他学者在非细胞肺癌[2]、巴雷特食道癌[5]、结肠癌[4]、前列腺癌[6]中也都发现p27蛋白与预后呈正相关。
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Puay等[3]和Esposito等[2]发现在非小细胞肺癌和T1a,b期乳腺癌中p27定位于胞核，而Surendra[5]和Loda[4]则发现p27在巴雷特食道癌和结肠癌细胞的胞浆胞核中都有表达。Surendra提到p27的定位是一个有趣和有意义的问题。他认为，当p27定位于胞核时，其抑制肿瘤活性的降低和消失可能性就小，也就是说p27蛋白的表达定位于胞核是其抑制肿瘤的前提条件，而胞浆p27表达则与生存期减少有关，但是p27也可定位于胞浆的机制尚不清楚。我们研究发现p27在乳腺癌中的表达主要定位于癌细胞的胞浆，只有少数胞核着色，经统计学分析发现p27低表达与TNM分期晚、淋巴结转移、局部复发、远处转移显著相关，无论是在全部病人中还是在淋巴结亚组病人中p27低表达都与生存期短、预后差显著相关，p27高表达则相反，Cox单因素和多因素模型显示p27是乳腺癌的一个独立的预后标志物，临床医生可以参考p27表达的高低来决定术后是否采用辅助治疗，若p27低表达无论淋巴结有无转移都采用辅助治疗，若p27高表达则考虑减小辅助治疗力度。
, http://www.100md.com
通讯作者：曹红亮：Tel：86-27-87330104
参考文献：
[1]Polyak K, kato JY, Solomon MJ, et al.p27 kipl,a cyclin-cdk inhibitor, links transforming growth factor-beta and contact inhibition to cell cycle arrest [J]. Genes Dev,1994,8:9～ 22.
[2]Esposito V, Baldi A, De luca A, et al. Prognostic role of the cyclin-dependant kinase inhibitor p27 in non-small cell lung cancer [J]. Cancer Res,1997，57:3381～ 3385.
, http://www.100md.com
[3]Tan P,Cady B,Wanner M, et al. The cell cycle inhibitor p27 is an independent prognostic marker in small (T1a,b) invasive breast carcinomas [J]. Cancer Res,1997， 57:1259～ 1263.
[4]Loda M,Cukor B,Tam SW,et al. Increased proteasome-dependant degradation of cyclin-dependant kinase inhibitor p27 in agreessive coloreactal carcinomas [J].Nat Med,1997， 3:231～ 234.
[5]Singh SP,Lipman J,Goldman H,et al.Loss or altered subcellular localization of p27 in Barrett's associated adenocarcinoma [J]. Cancer Res,1998， 58:1730～ 1735.
[6]Yang RM, Naitoh J, Murphy M, et al. Low p27 expression predicts poor disease- free survival in patients with prostate cancer [J].J Urol,1998,159:941～ 945.
收稿日期:1999-06-25, 百拇医药
单位：曹红亮(湖北医科大学附属第二医院肿瘤科，湖北武汉430071)；张广德(湖北医科大学附属第二医院肿瘤科，湖北武汉430071)；夏文华(湖北医科大学附属第二医院肿瘤科，湖北武汉430071)；肖继平(湖北医科大学附属第二医院肿瘤科，湖北武汉430071)；陈爱军(湖北医科大学附属第二医院肿瘤科，湖北武汉430071)
关键词：p27；乳腺癌；免疫组织化学；预后
摘 要
摘 要：目的：p27基因是一种肿瘤抑制基因。它在人类一些恶性肿瘤的表达水平与预后呈正相关。本研究探讨其在乳腺癌中的表达水平与预后的关系。方法：用免疫组化检测p27蛋白在66例乳腺癌中的表达水平，然后用χ2检验其与临床病理学特征的关系，Logrank检验p27的表达与生存时间的关系，Cox回归模型作单因素和多因素预后分析。结果：p27在乳腺癌中的高表达率为53.03%(35/66)；低表达率为46.97%(31/66)。p27低表达与乳腺癌分期晚，易发生淋巴结转移、局部复发和远处转移显著相关，Logrank检验发现p27蛋白的表达与乳腺癌患者的生存期呈正相关，Cox模型则显示p27是乳腺癌的一个独立的预后标志物。结论：p27低表达与乳腺癌分期晚，易发生淋巴结转移、局部复发、远处转移、以及预后差、生存期短显著相关，p27高表达则相反。我们认为p27蛋白是乳腺癌的一个独立的预后标志物。
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分类号：R737.9 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(2000)03-0239-03
The relationship between p27 expression in
breast cancer and the prognosis
CAO Hong-liang ZHANG Guang-de XIA Wen-hua et al.
(Department of Oncology,The Second Affiliated Hospital of Hubei Medical University,Hubei Wuhan 430071,P.R. China)
Abstract：Objective： The relationship between the expression of p27 tumor suppressor gene and prognosis of breast cancer was studied.Method： The expression of p27 in 66 breast cancer specimens was detected by immunohistochemical method. The relationship between p27 expression and clinicopathological characteristics or survival time was analyzed by χ2 test or log rank test, respectively, while univariate and multivariate prognostic analyses were performed by using Cox's regression model. Results： The high p27 expressive rate in breast cancer was 53.03% (35/66),while low expressive rate was 46.97% (31/66). Low p27 expression in breast cancer was significantly associated with late TNM stage, high incidence of lymph node metastasis,local recurrence and distant metastasis.Log rank test showed that the p27 expression was positively correlated with survival time and Cox's regression indicated that p27 was an independent prognostic marker of breast cancer. Conclusion： Low p27 expression in breast cancer was significantly associated with late TNM stage,high incidence of lymph node metastasis, local recurrence， distant metastasis， poor prognosis and, short survival time. p27 is an independent and valid prognostic marker of breast cancer.
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Key words：p27;Breast cancer;Immunohistochemistry;Prognosis▲
p27是由Poly等[1]在1994年用TGF-β和细胞接触抑制导致的静止细胞MV1Lu抽提物中发现的一分子量为27KD的热稳定蛋白。人p27基因定位于12P13，它的表达产物P27蛋白能通过抑制细胞周期素依赖性的蛋白激酶而抑制细胞周期，从而阻止肿瘤的形成。国外学者发现p27蛋白在非小细胞肺癌、T1a,b期乳腺癌、结肠癌、巴雷特食道癌和前列腺癌中[2～6]的表达水平与淋巴结转移可能性大，预后差显著相关。我们用免疫组化对66例乳腺癌的p27蛋白的表达水平进行了检测并分析了其与临床病理学特征和预后的关系。
1 材料与方法
1.1 材料
, http://www.100md.com 取自我院肿瘤科1987～1994年收治的经病理证实的且有随访和预后资料的原发性乳腺癌66例，患者年龄19～74岁，平均49岁，随访48～120个月(中位期82个月)，全组病例均行乳腺癌根治术或改良根治术，术后18例辅以化疗，11例辅以放疗，17例辅以放化疗，20例未行辅助治疗。
1.2 试剂与方法
p27鼠抗人单克隆抗体、SP二抗试剂盒和DAB显色试剂盒均购自福建迈新公司，一抗工作浓度1∶50。免疫组化实验步骤按说明书进行，抗原修复采用高压修复。PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判断
由两位免疫组化室的病理医师在不知道任何临床和病理资料的情况下对免疫组化染色进行评估，p27在乳腺癌中的表达主要位于胞浆，胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，每个视野阳性细胞数<50%为低表达，≥50%为高表达[5]，每张切片至少观察5个视野。
, 百拇医药
1.4 统计学分析
用SPSS7.0统计软件进行统计分析，计数资料用卡方检验，生存曲线比较用Logrank检验，单因素和多因素预后分析采用Cox回归模型。
2 结果
2.1 p27在乳腺癌中的表达与临床病理学特征的关系
p27在乳腺癌中的表达主要位于胞浆(图1,2)，只有少数胞核着色。p27高表达率为53.03%(35/66)，p27低表达率为46.97%。p27低表达与乳腺癌分期晚，易发生淋巴结转移、局部复发、远处转移显著相关，p27高表达则相反。p27表达与年龄、月经状况、肿瘤大小无明显相关性，(表1)。
表1 p27的表达与乳腺癌临床病理学特征的关系
临床病理学特征
, 百拇医药
n
p27的表达情况
χ2
P值
低表达
高表达
年龄(岁)
<50
44
22
22
0.64
>0.25
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≥50
22
9
13
月经状况
绝经前
49
24
25
0.31
>0.5
绝经后
17
, 百拇医药 7
10
肿瘤大小(cm)
<2.0
8
3
5
2.18
>0.25
2～5
37
15
22
>5.0
, 百拇医药
21
13
8
淋巴结状况
+
41
25
16
8.5
<0.005
-
25
6
19
, 百拇医药
分期
Ⅰ、Ⅱ
30
9
21
6.36
<0.025
ⅢⅣ
36
22
14
ER
+
45
, 百拇医药
17
28
4.8
<0.05
-
21
14
7
局部复发
无
42
12
30
15.70
, 百拇医药
<0.005
有
24
19
5
远处转移
无
54
19
35
-
<0.001
有
12
, 百拇医药
12
0
图1 乳腺浸润性导管癌,细胞浆p27高表达,SP×400
图2 乳腺髓样癌,细胞浆p27低表达,SP×400
2.2 p27的表达与乳腺癌患者生存期的关系
p27高表达组35例，术后行化疗者8例，行放疗者6例，放疗化疗都采用者9例，未行辅助治疗者12例；p27低表达组31例，术后行化疗者10例，行放疗者5例，放疗化疗都采用者8例，未行辅助治疗者8例，两组之间的治疗方式无差异(χ2=0.600,P>0.75)
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在全部患者中p27高表达组与低表达组的生存曲线如图3所示，表明p27的表达与乳腺癌患者的预后呈正相关，p27高表达生存期明显高于p27低表达。在淋巴结阳性和阴性患者中，p27高表达的生存期也都明显长于p27低表达者。
图3 全部病人p27表达与生存期的关系
Cox单因素、多因素分析结果发现p27是乳腺癌的一个独立的预后标志物(表2、表3)。
表2 66例乳腺癌单因素Cox模型分析结果
因素
参数
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风险比
标准误
χ2
P值
肿瘤大小
1.0096
2.744
0.4746
4.5211
0.0335
淋巴结状况
1.3372
3.809
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0.4586
8.504
0.0035
分期
0.8471
2.333
0.2854
8.8121
0.003
ER
-0.4638
0.629
0.4273
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1.1783
0.2777
p27
-2.7989
0.061
0.7440
14.1526
0.0002
表3 66例乳腺癌多因素Cox模型分析结果
因素
参数
风险比
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标准误
χ2
P值
淋巴结状况
1.6450
5.181
0.5378
9.3555
0.0022
p27
-2.9674
0.051
0.7673
, 百拇医药
14.9578
0.0001
3 讨论
近些年来，在细胞生物学和分子生物学方面的进展虽然大大地加深了对肿瘤发生、发展的认识，但其具体的机制尚未完全阐明，目前恶性肿瘤的治疗一般仍以手术为主，化疗、放疗为辅。何种病人术后需要行辅助治疗临床上主要还是根据淋巴结有无转移、TNM分期、病理类型。然而有的患者淋巴结无转移、TNM分期较早，但是治疗后生存期仍很短，这与肿瘤的生物学特性有关，为了判断肿瘤的生物学特性，国内外学者目前都在致力于研究能够预测恶性肿瘤病人预后的生物学指标，目的是更合理的应用综合治疗方法，以提高患者的生存期。
p27就是国外学者研究得较多的一种预后因子。Puay等[3]发现p27在T1a,b期乳腺癌中的低表达与淋巴结转移可能性大、生存期短、预后差显著相关，p27高表达则相反，而其他的生物学指标(p53、ER、PR、MVD、ki-67/MIB-1cdc25B、C-erB2)与T1a,b期乳腺癌的预后没有显著相关性。其他学者在非细胞肺癌[2]、巴雷特食道癌[5]、结肠癌[4]、前列腺癌[6]中也都发现p27蛋白与预后呈正相关。
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Puay等[3]和Esposito等[2]发现在非小细胞肺癌和T1a,b期乳腺癌中p27定位于胞核，而Surendra[5]和Loda[4]则发现p27在巴雷特食道癌和结肠癌细胞的胞浆胞核中都有表达。Surendra提到p27的定位是一个有趣和有意义的问题。他认为，当p27定位于胞核时，其抑制肿瘤活性的降低和消失可能性就小，也就是说p27蛋白的表达定位于胞核是其抑制肿瘤的前提条件，而胞浆p27表达则与生存期减少有关，但是p27也可定位于胞浆的机制尚不清楚。我们研究发现p27在乳腺癌中的表达主要定位于癌细胞的胞浆，只有少数胞核着色，经统计学分析发现p27低表达与TNM分期晚、淋巴结转移、局部复发、远处转移显著相关，无论是在全部病人中还是在淋巴结亚组病人中p27低表达都与生存期短、预后差显著相关，p27高表达则相反，Cox单因素和多因素模型显示p27是乳腺癌的一个独立的预后标志物，临床医生可以参考p27表达的高低来决定术后是否采用辅助治疗，若p27低表达无论淋巴结有无转移都采用辅助治疗，若p27高表达则考虑减小辅助治疗力度。
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通讯作者：曹红亮：Tel：86-27-87330104
参考文献：
[1]Polyak K, kato JY, Solomon MJ, et al.p27 kipl,a cyclin-cdk inhibitor, links transforming growth factor-beta and contact inhibition to cell cycle arrest [J]. Genes Dev,1994,8:9～ 22.
[2]Esposito V, Baldi A, De luca A, et al. Prognostic role of the cyclin-dependant kinase inhibitor p27 in non-small cell lung cancer [J]. Cancer Res,1997，57:3381～ 3385.
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[3]Tan P,Cady B,Wanner M, et al. The cell cycle inhibitor p27 is an independent prognostic marker in small (T1a,b) invasive breast carcinomas [J]. Cancer Res,1997， 57:1259～ 1263.
[4]Loda M,Cukor B,Tam SW,et al. Increased proteasome-dependant degradation of cyclin-dependant kinase inhibitor p27 in agreessive coloreactal carcinomas [J].Nat Med,1997， 3:231～ 234.
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收稿日期:1999-06-25, 百拇医药